Что такое цифровая ПЦР на нанопланшетах?

В цифровой ПЦР (dPCR) образец нуклеиновой кислоты разделяется на множество отдельных реакций, случайным образом распределяя целевые молекулы. Каждая часть содержит ноль, одну или много молекул. После амплификации до конечной точки измеряется флуоресцентный сигнал. Реакция без целевой молекулы считается 0/отрицательной, а реакция с одной или более целевыми молекулами — 1/положительной. Начальное количество копий и концентрация целевой молекулы рассчитываются с помощью статистики Пуассона. Цифровая ПЦР основана на принципе разделения, достигаемом в микрофлюидных нанопластинах. Благодаря случайному распределению и разделению конкуренция между мутантным и диким типами значительно снижается, что приводит к появлению флуоресцентного сигнала даже от одной целевой молекулы/редкого события в данной части. Это обеспечивает более высокую чувствительность dPCR по сравнению с qPCR. Цифровая ПЦР также позволяет одновременно обнаруживать несколько целевых молекул (до 12) в одном мультиплексном цикле dPCR. Такой уровень мультиплексирования технически сложен для qPCR. Поскольку это требует сложной коррекции спектральных перекрестных помех в реальном времени, зависящей от концентрации, во время усиления сигнала. Цифровая ПЦР эффективно обнаруживает редкие события, вариации числа копий, небольшие различия в экспрессии генов или абсолютные количества нуклеиновых кислот без использования стандартных кривых. Посетите QIAGEN: https://www.qiagen.com/products/instruments-and-automation/pcr-instruments/qiacuity-digital-pcr-system "